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嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合，番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布；当软骨受到损伤时软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色，通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，固绿与胶原纤维结合，不宜褪色，番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨，软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨，软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。

• 10%福尔马林固定液、脱钙液、蒸馏水、系列乙醇
  
• 二甲苯或环保脱蜡透明液、中性树胶

• 需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。
  
• Weigert染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h后失去染色力。
  
• 切片在番红O染色液中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。
  
• 切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。
  
• 番红O染色液染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。
  
• 95%乙醇脱水时间不宜过长。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片，常规二甲苯或脱蜡透明液脱蜡至水。
  
• 滴加新鲜配制的Weigert染液染色3～5min，水洗。
  
• 酸性乙醇分化液分化15s，蒸馏水洗5～10min。
  
• 滴加固绿染色液浸染3～8min。
  
• 用乙酸溶液快速洗涤切片10-15s，以便去除残留的固绿，晾干。
  
• 滴加番红O染色液内浸染3～8min。
  
• 按95%乙醇2-3s、无水乙醇2-5s、无水乙醇1min脱水。
  
• 二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。